《表2 各基因多态性位点的野生型和突变型熔解峰的Tm值》

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《基于多色探针熔解曲线分析技术的华法林个体化用药相关基因多态性快速检测方法》


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注:Tm为平均值;ΔTm=Tm(野生型)-Tm(突变型).

MMCA体系对各多态性进行区分是依据熔解峰Tm值的不同,4个多态性位点分别分布在4个不同的检测通道,每个通道可能有2个不同的熔解峰.为避免各熔解峰Tm值的波动范围太大而导致结果误判,对各熔解峰Tm值的重复性和再现性进行考察.结果表明(表2):各熔解峰Tm值较稳定,其3倍标准偏差(3SDs)均小于0.9℃,相邻的熔解峰之间没有交叠,区分度良好;各多态性位点的不同等位基因之间Tm值差异波动也很稳定,ΔTm均大于3.5℃,3SDs均小于0.53℃.由以上结果可见不同操作员在不同实验室使用不同批次配制的MMCA体系检测多份质粒标准品时,均能获得稳定的检测结果,说明MMCA体系具有良好的重复性和再现性.