《表1 引物信息：转录因子ZnF-706在鳞翅目昆虫中的进化格局及在家蚕中的功能》

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《转录因子ZnF-706在鳞翅目昆虫中的进化格局及在家蚕中的功能》

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基于ZnF-706基因序列，利用在线软件CHOPCHOP分别设计了23 bp的3个靶位点序列ZNF-tar1，ZNF-tar2和ZNF-tar3（图4），靶点通式为:5'-N（20）-NGG-3'（N为任意碱基）。为满足体外转录的实验需求，靶位点前两位最好为GG。为了获得sgRNA转录模板，体外合成针对靶位点的正向引物（ZnF-sgRNA-F1，ZnF-sgRNA-F2，Zn F-sgRNA-F3），该段引物包括了T7启动子序列、sgRNA靶位点序列和下游引物部分重叠的sgRNA骨架序列（sgRNA-R）（引物见表1） 。经PCR，纯化，获得体外转录sgRNA模板。