《表1 引物信息：川乌头F3′5′H基因在矮牵牛中的遗传转化及功能分析》

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《川乌头F3′5′H基因在矮牵牛中的遗传转化及功能分析》

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川乌头第4时期花朵总RNA的提取按照Trizo试剂说明书进行，按照AMV反转录酶说明书将总RNA反转录为cDNA。根据已克隆发表的川乌头Ac-F3′5′H基因（GenBank登录号:JN635708）核苷酸序列（王翠丽等，2012），在其5'和3'端非编码区分别设计含有与pCAMBIA1301-220.6植物表达载体T-DNA区对应酶切位点的扩增引物A-SmaⅠ（CCC GGG为SmaⅠ酶切位点，ACT为保护碱基）和A-SacⅠ（GAGCTC为SacⅠ酶切位点，ACT为保护碱基）（表1） ，以携带有川乌头第4时期花朵c DNA为模板进行PCR扩增。PCR反应体系中各组分浓度和比例参考Taq酶说明书，PCR反应条件:94℃预变性3 min，94℃变性30 s，56℃退火45 s，72℃延伸1.5 min，33个循环，72℃延伸10 min。PCR结果经电泳检测，切取目的基因条带按胶回收试剂盒说明书进行回收纯化，再按pMD-18T说明书将目的基因连到克隆载体后转化大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞，筛选阳性克隆送交上海杰李生物技术有限公司进行测序。