《表1 本研究中ASSVd引物序列》

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《苹果锈果类病毒实时荧光定量反转录PCR检测及其在苹果树体内的扩散转移规律》

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ASSVdInvitro-pF中斜体字母表示T7启动子；下划线字母表示酶切位点。The italic letters indicate the T7 promoter，and the underlined letters indicate the digestion site of restriction enzyme in the primer ASSVdInvitro-pF.

参照多糖多酚植物总RNA提取试剂盒说明书提取携带ASSVd的苹果组织总RNA，按照Trans Script?Fly First Strand c DNA Synthesis Super Mix说明书合成第一链c DNA。参照杨金凤等（2015）方法利用引物ASSVd Qxin3-F和ASSVd Qxin3-R（表1）扩增ASSVd基因组序列，本试验所有引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。25μL PCR扩增体系：c DNA模板0.5μL、20 pmol/μL正反向引物各1.0μL、dd H2O 10μL、2×Es Taq Master Mix 12.5μL。反应程序：94℃预变性2 min；94℃变性45 s，64.4℃退火45 s，72℃延伸30 s，35个循环；72℃再延伸10 min。利用DNA凝胶回收试剂盒对330 bp特异性扩增产物进行胶回收，连接至p EASY?-T1 simple载体上，送至深圳华大基因股份有限公司进行测序，将经鉴定正确的阳性重组质粒作为后续试验的标准品。