《表1 本研究中所有引物序列》

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《miR-497调控SALL4-RIPK1轴促进肝癌MHCC97L细胞坏死》

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注:蓝色代表酶切位点保护碱基；红色代表酶切位点碱基序列。

按照分子克隆的方法，用全式金Trans ZolTMUp Plus RNA Kit（ER501-01，全式金）提取MHCC97L细胞RNA，根据Roche公司Transcriptor First Strand c DNA Synthesis Kit（04897030001，Roche）说明书将RNA逆转录合成c DNA。用Primer Star Max（R045A，Ta Ka Pa）进行扩增获得SALL4基因和SALL4基因3&apos；段UTR，PCR条件如下:98℃预变性5 min后进入PCR循环，SALL4反应条件为98℃变性30 sec；55℃退火30 sec；72℃延伸90 sec，34个循环后，72℃，5 min；12℃，∝。PCR产物SALL4和载体pc DNA3.1-GFP（#70219，Addgene）经Bam H1/Xba1双酶切后，SALL4基因3&apos；段UTR和载体p MIR-REPORTTMLuciferase经Pme1/Spe1双酶切，T4 DNA连接酶（D2011A，Ta Ka Pa）进行连接，形成GFP-SALL4和p MIR-SALL4-Luciferase质粒。重组质粒在大肠杆菌DH5α感受态中大量扩增，并按照E.Z.N.A.TM Plasmid Mini Kit（D6942-02，OMEGA）使用说明书进行提取和纯化。经相应双酶切和基因测序正确后续备用。本研究中所有引物如表1所示。