《表1 过表达载体构建引物》

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《烟草烟碱相关miRNA筛选及验证》

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加入设计好的目标片段引物（表1），以红花大金元烟草基因组DNA样品为模板进行PCR扩增目标片段。PC2300S载体用Sac I与Bam HI双酶切处理并回收，与PCR扩增产物进行重组，重组产物转化大肠杆菌，涂抗性平板，挑选克隆子摇菌，用上游引物与PCB-seq E菌落PCR验证阳性克隆，然后进行测序验证。