《表1 植物表达载体构建过程中使用的引物序列》

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《以HbFT2基因为可视化标记的高效烟草遗传转化体系的构建与应用》

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下划线表示酶切位点，前方碱基为保护碱基。

（1）pCAMBIA2301-35S-nos载体构建。根据pCAMBIA2301载体序列设计扩增35S启动子和nos终止子的引物，并分别在两端添加酶切位点Eco RI/Sac I和Sal I/HindIII，引物序列如表1所示；将35S启动子和nos终止子插入到pCAMBIA2301载体的多克隆位点处。以pCAMBIA2301质粒为模板，利用PrimerSTAR Max酶扩增，rTaq酶72°C扩增10 min加尾后连接pMD 19-T载体，挑取阳性克隆测序。将测序正确的pMD 19-T-nos提取质粒，和载体pCAMBIA2301质粒分别用Sal I和HindIII双酶切，酶切产物分别进行挖胶和溶液回收纯化，利用T4连接酶连接，通过nos终止子特异引物鉴定阳性克隆，命名为pCAMBIA2301-nos。将测序正确的pMD 19-T-35S与pCAMBIA2301-nos提取质粒，分别用Eco RI和Sac I双酶切后回收纯化连接，35S和nos特异引物鉴定阳性克隆，命名为pCAMBIA2301-35S-nos（图1-A）。