《表2 ARF与Aux/IAA过表达载体构建与qRT-PCR检测引物列表》

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《百子莲2个ARF基因与2个Aux/IAA基因的全长克隆与序列分析》


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采用pHB质粒并选定PstⅠ和Bam HⅠ为限制性酶切位点。拼接测序结果获得基因全长序列后设计扩增引物(表2),以百子莲cDNA文库为模板,在基因ORF片段的上下游分别引入Bam HⅠ和PstⅠ酶切位点。反应程序为94℃3min;94℃30 s,55℃30 s,72℃1 min,35个循环;72℃3 min。随后采用酶切连接法构建载体,测序验证载体构建成功后转入农杆菌GV3101感受态,挑取农杆菌阳性单克隆经PCR检测后,以花序浸染法侵染拟南芥。