《表1 ApARF与ApAux/IAA基因扩增与RACE引物列表》

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《百子莲2个ARF基因与2个Aux/IAA基因的全长克隆与序列分析》

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以百子莲叶片为材料，利用Trizol试剂提取并纯化总RNA[11]后采用Prime Script Reverse Transcriptase试剂盒进行反转录。以ApARF与ApAux/IAA基因核心片段序列为参考设计特异性引物（表1）进行PCR扩增，反应程序为:94℃3min；94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，35个循环；72℃3 min。产物经琼脂糖电泳检测回收后连接p MD18-T，转化大肠埃希菌测序验证核心序列的准确性，以其为依据设计3'-RACE与5'-RACE的特异性引物（表1）。按照购于TaKaRa公司的OligotexTM-dT30m RNA Purification Kit操作说明，运用百子莲总RNA建立m R-NA富集纯化体系，按照SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit（Clontech）用户手册构建5'-与3'-RACE cDNA文库。