《表1 rHuHF表达条件正交试验因素与水平》

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《人源重链铁蛋白纯化及其纳米粒制备》

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采用恒温摇床培养（500 mL体系）与发酵罐发酵（3 500 mL体系）2种方式比较蛋白表达量差异，验证发酵罐表达目标蛋白的稳定性和高产性。将工程菌BL21-pET3a-rHuHF活化，以4%的体积分数接种于含工作浓度AMP的LB液体培养基中，置于37℃、200 r/min摇床培养10 h，获得种子液，再以5‰的体积分数种入新的含工作浓度AMP的LB培养基中。在分别对发酵罐搅拌转速、发酵罐空气通量及诱导表达时间进行单因素试验的基础上，控制其他因素保持不变，改变发酵罐搅拌转速、空气通量和诱导表达时间（表1），针对以上3个因素进行IPTG诱导表达的正交试验[21]，确定最佳表达条件。发酵过程中每隔1 h取样检测菌液浓度（OD600 nm）及菌液pH值变化，当OD600 nm值接近为1.0时，加入IPTG溶液至终浓度0.1 mmol/L[22]，表达结束得发酵菌液。