《表1 q RT-PCR引物序列》

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《草地贪夜蛾自噬相关基因的鉴定》

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根据草地贪夜蛾Atg基因序列，利用Premier Primer 5.0设计荧光实时定量PCR引物，序列见表1。采用SYBR Green荧光定量PCR试剂盒，反应体系为SYBR Green混合液（2×） 10μL，引物（10μmol/L）各0.2μL，c DNA 0.1μL（相当于10 ng总RNA），加dd H2O至总体积20μL。反应程序为：95℃预变性5 min；（95℃10 s，60℃20 s，72℃20 s）循环40次；溶解曲线在65～95℃每隔0.5℃采集1次，每次采集5 s，在CFX 96仪器（Bio-Rad）上进行反应。以草地贪夜蛾Ecdysoneless（ECD）基因作为内参基因[14]，采用2-??ct法[15]计算基因相对表达量，每个基因设置3个重复，进行3次生物学重复。