《表1 q RT-PCR引物序列》
使白色念珠菌在0 mmol/L、14.0 mmol/L和27.9 mmol/L浓度的去甲亚精胺环境下在甲基丙烯酸树脂片上形成生物膜。在37℃下培养48 h后,用灭菌的探针将生物膜刮下来。通过离心收集生物膜。玻璃磁珠破壁并使用TRIzol提取RNA。采用Nanodrop 2000检测RNA的纯度和浓度,并使用琼脂糖凝胶电泳法检测RNA的完整性。使用大连Ta Ka Ra公司试剂盒(操作方法参考使用说明书)将RNA反转录获得cDNA,反应条件设定为42℃,2min,在4℃冰箱中保存。PCR反应体系的总体积为20μL,分别是荧光染料(SYBR Premix Ex TaqI)10μL,上游引物(PCR Forward Primer)0.8μL,下游引物(PCR Reverse Primer)0.8μL,参比染料(ROX Reference DyeI)0.4μL,引物模板2μL和灭菌蒸馏水6μL。反应程序如下:在95℃预变性30 s,在95℃变性5 s,在55℃退火30 s,在72℃延伸30 s,40个循环,每个基因组设置3个复孔,结果使用2-△△CT分析法分析数据[14]。引物序列见表1。
图表编号 | XD0059282600 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.05.25 |
作者 | 曹焱帆、章可可、张燕妮、汤丰瑜、胡凤婷、叶青松 |
绘制单位 | 温州医科大学口腔医学院干细胞与组织工程研究所、温州医科大学口腔医学院干细胞与组织工程研究所、温州医科大学口腔医学院干细胞与组织工程研究所、温州医科大学口腔医学院干细胞与组织工程研究所、温州医科大学口腔医学院干细胞与组织工程研究所、温州医科大学口腔医学院干细胞与组织工程研究所 |
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