《表1 PCR扩增引物：沙质微泡菌β-1,3(4)-葡聚糖酶的克隆表达及酶学性质》

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《"沙质微泡菌β-1,3(4)-葡聚糖酶的克隆表达及酶学性质"》

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注：Y:C或T；N:A、T、C或G；W:A或T；S:G或C；R:A或G；D:A、G或T；酶切位点以下划线标识.

根据扩增得到的保守序列，分别设计基因上游与下游3条特异性引物sp1-F/R、sp2-F/R和sp3-F/R（表1）。采用TAIL-PCR方法[20]，应用4条LAD引物及一条嵌套的特异性引物AC（表1）通过三轮PCR扩增已知序列片段的侧翼序列。扩增得到的序列测序后拼接，并通过NCBI中Open reading frame finder（ORF finder）项目得到β-1，3（4）-葡聚糖酶全长序列。