《表3 纯化参数表格:一种来源于大菱鲆的热敏型尿嘧啶DNA糖苷酶的克隆表达及酶学性质鉴定》

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《一种来源于大菱鲆的热敏型尿嘧啶DNA糖苷酶的克隆表达及酶学性质鉴定》


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由于大肠杆菌重组表达类型为胞内可溶性表达,本实验选择破碎细胞后对其上清液进行纯化。大菱鲆UDGase的诱导表达条件为1mmol/L IPTG,16℃,200r/min,16h。使用Co离子作为金属螯合层析的金属离子后,纯度达到60%以上。SmUDGase不结合Q阴离子交换基质,对收集的洗脱液进行适度的稀释后过Q阴离子交换柱用于结合杂蛋白质。收集的流穿液使用Blue亲和层析完成最后的纯化。所得纯酶经透析后保存于-20℃(图2b)。发酵体积2L,透析后可获得5.5ml成酶液,蛋白质纯度约为95%,浓度为0.55mg/ml,纯酶产率为1.51mg/L(表3)。