《表2 代表菌株鉴定结果：海洋源蛋白酶产生菌筛选及酶学特性的初步研究》

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《海洋源蛋白酶产生菌筛选及酶学特性的初步研究》

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将上述复筛得到的10株菌株，革兰氏染色观察。以细菌通用引物27F和1492R对代表菌株进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，均得到重复性好且稳定、清晰的特异性条带，片段大小为1200 bp左右，电泳图谱如图2所示。再将测序后的序列在NCBI数据库进行比对，所得结果如表2所示。结果表明筛选出的菌株可以分为3类:芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、普罗威登斯菌属（Providencia sp.）、假单胞菌属（Pseudomonas sp.），且置信度≥98%，其中解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）较多。目的菌株SW5为甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus），置信度为100%。研究发现鱿鱼中产蛋白酶的微生物主要为芽孢杆菌属和假单胞菌属[19-20]。芽孢杆菌产生蛋白酶能力较强，是常见的商业产蛋白酶菌株，有学者对芽孢杆菌所产的蛋白酶学性质进行了研究，发现此类菌具有较高的酶活力，可能是通过产生蛋白酶降解蛋白质[21]。鱿鱼中的优势菌群主要为假单胞菌，假单胞菌大多耐低温，分泌的蛋白酶却耐高温，即使经过高温处理后，在食品中仍然能检测到这种酶的存在，在低温储藏条件下，残留的蛋白酶也可以继续分解蛋白质[22]。国内对普罗威登斯菌的报道较少，一般在肉类食品中容易检测到，是动物肠道的正常菌群，同样对蛋白质具有分解作用[23]。