《表1 PCR扩增引物序列》

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《CD133通过上皮间质转化促进乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭及转移》

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使用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养MDA-MB-231细胞，至细胞融合度达到60%时，按照Lipofectamine2000说明书进行转染操作，转染后48 h，用Trizol法提取细胞总RNA。将提取的总RNA按RNA反转录试剂盒（reverse-aid-first-strangcDNA合成试剂盒）说明书反转录RNA为cDNA，合成的cDNA使用TB GreenTMPrimix Ex TaqTM试剂盒通过PCR仪进行扩增检测，以GAPDH为内参检测CD133表达。最终Ct值采用2-ΔΔCt方法分析。实时荧光定量PCR采用两步PCR扩增标准程序。引物序列见表1。步骤1:预变性（95℃，30 s）；步骤2:PCR反应（95℃5 s，60℃30 s），共40个循环。所有试验均重复3次。