《表1 菊花Cm2S荧光实时定量PCR引物》

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《菊花胚发育相关基因Cm2S的克隆与表达分析》

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采用Trizol法（TaKaRa，日本）提取正常生长条件下‘雨花落英’的茎、叶、管状花、舌状花、未授粉的子房、杂交授粉后12 d和18 d正常和败育的胚胎的总RNA，反转录为cDNA模板，利用Primer 5.0设计引物Cm2S-RT-F、Cm2S-RT-R（表1），以菊花EF1α（GenBank accession:KF305681）作为内参基因设计内参引物CmEF1α-F和CmEF1α-R。引物由Invitrogen公司合成，SYBR Premix Ex TaqTM购自TaKaRa公司，qRT-PCR反应采用SYBR?Green Realtime PCR反应体系。反应程序：95℃2 min，95℃1 5 s，55℃1 5 s，72℃20 s，循环数为40个。程序结束后得到每个样品的CT值，采用2-??CT法进行相对定量分析，每个样品进行3次重复试验。