《表1 qRT-PCR引物序列》

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《水稻叶片早衰突变体wss1的性状鉴定及基因定位》

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在水稻分蘖盛期，采用Trizol法（Invitrogen）提取野生型与突变体叶片总RNA。根据反转录试剂盒（KR106，天根生化科技（北京）有限公司）说明书要求，将RNA反转录成cDNA。水稻基因Osh69[28]、OsI85[29]、SGR[30]和RCCR1[31]与水稻衰老相关，因此利用q RT-PCR分析这4个衰老基因在野生型及突变体中的表达情况，扩增引物见表1。q RT-PCR分析采用ABI 7500/7500 Fast RealTime PCR System仪器，相对表达量参考Livak等[32]报道的2-△△Ct法，用水稻泛素基因（OsUbi）做为标准化内参，扩增引物见表1。按照SYBR?Premix ExTaqTM II试剂盒的说明进行操作（大连宝生生物公司）。每个样品设置3个重复。qRT-PCR体系（20μL）含2μL cDNA、0.8μL引物、10μL SYBR Green PCR Master Mix、7.2μL ddH2O。PCR程序为95℃预变性2 min；95℃15 s，60℃30 s，40个循环。