《表1 北京市温带臭虫电压门控钠离子通道（vgsc）基因PCR引物的核苷酸序列及退火温度》

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《北京市温带臭虫击倒抗性基因突变检测》

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参考Rinkevich等[11]的方法提取单只臭虫的基因组DNA，用nano drop测定样品的DNA浓度。以单只臭虫基因组DNA为模板，分两段扩增出vgsc中包含已知抗性位点的DNA片段：第1段采用引物BBparaF和BBpara-R扩增，其产物包含419位点的密码子；第2段采用引物CHVG-SC-F和CHVG-SC-R（表1），该扩增片段包含925位点以及936位点的密码子。PCR反应体系组成：2×Taq Master Mix（TIANGEN）12.5μl；正、反向引物各6μmol/L；DNA模板50～100 ng，无菌H2O加至25μl。PCR反应条件：95℃2min；94℃30 s；52℃或58℃30 s；72℃50 s；34个循环；72℃5 min。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，反向引物测序由北京擎科新业生物技术有限公司完成。