《表1 ESBLs基因PCR产物序列及退火温度 (℃)》

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《非小细胞肺癌患者化疗期间肺部感染分离的产超广谱β-内酰胺酶病原菌耐药基因检测》

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根据GenBank颁布的序列合成产ESBLs细菌基因引物，基因型包括SHV、TEM、VEB、PER、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA-2、OXA-10，由上海生工生物科技有限公司合成，各引物序列见表1。PCR反应体系（50μl）:上游引物与下游引物各1μl，细菌质粒DNA模板1μl，10×缓冲液5μl，氯化镁4μl，ddH2O7μl，2×Tag PCR Master Mix10μl。反应条件:95℃下预变性3 min，95℃下变性1min；退火，各引物退火温度见表1，30s，循环35次；延伸72℃下5min。取PCR扩增产物5μl进行2%琼脂糖凝胶电泳，40 min后在凝胶成像仪下观察结果。将PCR扩增产物回收纯化，送上海生工生物科技有限公司双向测序，测序结果经拼接后与GenBank颁布的序列进行对比分析。