《表1 QMSP引物探针序列、产物长度及退火温度》

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《大肠肿瘤Syndecan-2基因甲基化及临床意义》

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注:*p:磷酸化

采用QMSP技术对SDC2基因启动子区甲基化进行研究，针对亚硫酸盐转换后的DNA序列设计引物及探针，对甲基化等位基因进行特异性扩增。引物探针由上海生工生物工程有限公司合成。采用双重PCR扩增技术，同时扩增SDC2基因和内参基因。PCR反应体系:总体积为20μl，反应体系包括10μl 2×Mix，2μl DNA模板（经亚硫酸盐转化后），SDC2基因的正反向引物各0.4μl，荧光探针和封闭探针各0.3μl，内参基因的正反向引物各0.4μl，荧光探针0.3μl，5.5μl RNase-Free ddH2O。PCR扩增循环参数:45个循环，预变性95℃15 min，变性95℃3 s，60℃退火/延伸20 s。其中，内参基因为ACTB，采用甲基化指数（PMR）=2-ΔΔCt表示SDC2基因甲基化相对水平。见表1。