《表1 引物序列、产物长度和退火温度》

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《头孢哌酮钠舒巴坦钠诱导对铜绿假单胞菌的耐药性影响》


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每种菌株挑取单克隆菌落,在M-H平板中于37℃培育16~20 h。将一圈细菌用焦碳酸二乙酯(DEPC)水悬浮,13 000×g离心3 min,弃上清,在冰上加入2 mg溶菌酶溶液孵育15 min,然后置于37℃的水浴中孵育10 min。最终悬浮液用于进行总RNA分离。应用TaKaRa RNAiso Plus提取每种菌株的总RNA,然后使用TaKaRa PrimeScriptTM RT Reagent Kit with gDNA Eraser进行逆转录。使用TaKaRa TB GreenTM Premix Ex TaqTMⅡ进行q RT-PCR。所有引物均由广州睿博兴科生物公司合成,用于检测mexB、mexD、mexF、mexY、OprD的表达,引物序列、产物长度和退火温度见表1。用管家基因rpoD标准化上述mRNA的表达水平。