《表1 PCR引物序列:Annexin A2单克隆抗体抗肿瘤活性的实验研究》

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《Annexin A2单克隆抗体抗肿瘤活性的实验研究》


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分别用不同浓度(1∶200,1∶400)的外源性抗体处理细胞,以正常SP2/0细胞的腹水处理作为阴性对照,分别收集经过抗体及正常腹水处理的细胞,提取细胞总RNA,微量核酸仪测定RNA浓度,1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。提取的RNA经逆转录试剂盒逆转录合成cDNA,以合成的cDNA为模板,以细胞周期的相关基因E2F1、CDK6设计引物(表1)进行RT-PCR检测,以β-actin为内参照,实验反应条件为94℃3 min,94℃30 s,55℃30 s,72℃30 s,72℃5 min;4℃、∞;反应30个循环。RT-PCR反应结束后,取反应液10μl于2%琼脂糖凝胶中电泳35 min,条件为100 V和100 mA,用凝胶成像系统检测,观察分析实验结果。