《表1 本研究中所用引物》

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《冬麦免耕覆盖栽培对土壤丛枝菌根真菌多样性的影响》


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采用Fast DNA Spin Kit试剂盒(Illumina公司,美国)提取土壤AM真菌DNA,按照说明书步骤进行提取。引物信息如表1所示。扩增片段大小为280 bp。PCR扩增在ABI-2720扩增仪(美国ABI公司)上进行。扩增体系:5×反应缓冲液5μL,5×GC缓冲液5μL,2.5 mmol·L-1dNTP 2μL,10μmol·L-1前、后引物各1μL,DNA模板40 ng,Q5 DNA聚合酶(NEB公司,美国)0.25μL,ddH2O补足至25μL,扩增程序:98℃预变性2 min;98℃变性15 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s,共30个循环;72℃终延伸5 min,10℃保存;扩增产物利用2%琼脂糖凝胶电泳检测,采用凝胶回收试剂盒(美国AXYGEN公司)对目标片段进行切胶回收。由上海派森诺生物科技有限公司Illumina Mi Seq测序平台进行双端测序分析。