《表1 本研究中所用的引物》

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《利用CRISPR/Ca9技术靶向编辑芥蓝BoaZDS》

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采用CTAB法提取抗性植株的基因组DNA。以其为模板，使用载体中的潮霉素基因特异性引物Hyg-F和Hyg-R（表1）进行PCR扩增，1%的琼脂糖凝胶电泳检测CRISPR/Cas9载体是否成功转入芥蓝植株中，计算其转化效率（转化效率=转基因阳性植株数/总抗性植株数）。根据靶序列设计特异引物，以每个抗性植株的基因组DNA为模板，使用引物BoaZDS-CRISPR test-F和BoaZDS-CRISPR test-R（表1）进行PCR扩增，得到含有靶位点的片段后送测序，使用DNAMAN软件进行序列比对分析，计算突变率（突变率=突变株数/转基因株数）。对每个转基因突变植株的表型进行观察和拍照，记录和统计白化株的数量。