《表1 本研究中所用的引物》

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《草鱼源致病性维氏气单胞菌的鉴定及其黏附特性分析》


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用基因组DNA提取试剂盒提取分离菌株16-1的基因组DNA作为模板,以文献[8]报道的细菌16S rRNA基因通用引物(表1)PCR扩增16S rRNA。25μL PCR反应体系为:10×PCR buffer 2.5μL,MgCl2(25mmol)1.5μL,dNTP(10 mmol)0.5μL,Taq酶(5U·μL-1)0.3μL,上、下游引物(10μmol)各0.5μL,模板2.0μL,ddH2O 17.2μL。反应条件为:94°C预变性5 min;94°C变性30 s,52°C退火50 s,72°C延伸100 s,30个循环;72°C再延伸10 min。1.0%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物后,委托通用生物系统(安徽)有限公司对目的基因进行克隆与序列测定。