《表1 本实验中的引物序列》

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《S-亚胺还原酶和葡萄糖脱氢酶共表达系统的构建及手性胺的合成》

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注:加黑部分为线性化克隆载体最末端序列，是插入片段上下游载体同源序列 （用于同源重组）

利用无缝克隆的技术将质粒pET28a-GDH中酶切位点BglⅡ至gdh片段克隆至质粒pET28a-IRED中，构建共表达重组质粒pET28a-IRED-GDH，使得共表达基因具有独立的T7启动子和rbs序列。以质粒pET28a-IRED和质粒pET28a-GDH为模板，分别以28a-IRED-F/R和GDH-F/R为引物，PCR扩增制备线性化克隆载体pET28a-IRED和插入片段，使用DpnⅠ酶降解PCR扩增产物中的环状质粒模板，PCR产物胶回收后，配制重组反应体系，37℃反应30 min，重组反应后的产物转化到大肠杆菌DH5α中，涂布到卡那抗性平板并通过菌液PCR验证阳性克隆，送至公司测序。菌液PCR所用引物为IRED-GDH-F/R。将测序验证结果正确的阳性转化子转化至大肠杆菌表达宿主Bl21（DE3）中，构建重组共表达菌Bl21（DE3）/pET28a-IRED-GDH。