《表1 本实验用到的引物序列》

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《魁蚶Ets家族9个基因的克隆及其在病毒感染应答中的表达分析》

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根据本实验室的魁蚶转录组测序获得Ets家族的部分基因的全序列，使用Primer Premier 5.0软件设计ORF引物（表1），并利用KOD酶进行扩增。采用扩增体系（20μl）:cDNA模板1μl、KOD酶0.4μl、前引物0.5μl、后引物0.5μl、2×KOD酶缓冲液10μl、超纯水3.6μl、2 mmol/L dNTP 4μl；反应程序：94℃预变性4 min；94℃变性30 s，58.0℃退火30 s，68℃延伸2.0 min，35个循环。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后，利用琼脂糖凝胶回收试剂盒（TaKaRa）将目的条带进行切胶回收。随后，将回收的目的片段与pMD19-T载体（3∶1）在16℃连接过夜，取5μl连接产物与50μl大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α感受态细胞在42℃热激30 s。利用载体多克隆位点两侧的引物RV-M（GAGCGGATAACAATTTCACACAG）和M13-47（CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC）对单克隆进行菌落PCR鉴定。阳性单克隆经验定后送生派生诺（青岛）股份有限公司进行测序。