《表1 本实验用到的引物：一株内毒素缺陷型大肠杆菌的构建与鉴定》

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《一株内毒素缺陷型大肠杆菌的构建与鉴定》

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注：表中划线部分为该打靶元件对应敲除基因约50 bp的同源序列，引物F未划线部分为20 bp lox71序列，引物R未划线部分为20 bp lox66序列。

本实验所用引物见表1，以制备敲除大肠杆菌DH10B-2B中kdsD基因的线性双链DNA打靶元件的引物为例，根据GenBank中大肠杆菌K-12的kdsD基因序列（947734），在其上下游约100 bp处寻找约50 bp的序列，并于上游50 bp序列的5'端加上20 bp lox71的序列，下游50 bp的3'端加上20 bp lox66的序列（lox71及lox66为质粒R6K-box中打靶元件的部分基因序列），最终分别合成70 bp的引物对kdsD-F/kdsD-R。在kdsD基因前后约200 bp处分别截取约25 bp的序列kdsD-YZ-F/kdsD-YZ-R作为鉴定kds D基因敲除的引物。此外，从质粒R6K-box中KanR内部截取25 bp片段的kan-YZ-F用于kds D打靶元件插入DH10B-2B株基因组后的鉴定。其他基因敲除引物和插入基因的打靶元件设计同上。全部引物均由金斯瑞生物科技有限公司合成。