《表1 引物核苷酸序列：一株鸭源大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析》

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《一株鸭源大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析》

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(1）引物的设计与合成：根据GenBank中大肠杆菌外膜蛋白A编码序列的保守区域设计特异性引物，引物序列设计见表1。（2）反应体系的配置：以上述步骤获得的菌液作为模板进行菌液PCR检测，按照使用说明配制PCR反应体系。（3）反应程序设置：PCR反应体系设定完成后，按照表2中程序设定PCR仪程序。（4）凝胶电泳成像：以提取的大肠杆菌质粒DNA为模板，扩增大肠杆菌基因，并通过凝胶电泳检测。首先观察电泳槽的水平情况，通过调节脚垫旋钮将电泳槽置于水平面上。此后在30mL 1×TAE电泳缓冲液中称取0.24g琼脂糖，将琼脂糖颗粒在微波炉中完全溶解，冷却至50℃时加入10×上样缓冲液，混合并倒入橡胶板中并放置梳子，凝固后除去。然后将PCR反应产物与溴酚蓝混合并依次加到固化的凝胶孔中。在PCR反应结束后，设定120V、100mA于1×TAE电泳缓冲液中电泳，胶体右侧滴加marker。最后将电泳检测扩增条带置于凝胶成像系统中成像并记录。