《表2 PCR反应程序设置》
(1)引物的设计与合成:根据GenBank中大肠杆菌外膜蛋白A编码序列的保守区域设计特异性引物,引物序列设计见表1。(2)反应体系的配置:以上述步骤获得的菌液作为模板进行菌液PCR检测,按照使用说明配制PCR反应体系。(3)反应程序设置:PCR反应体系设定完成后,按照表2中程序设定PCR仪程序。(4)凝胶电泳成像:以提取的大肠杆菌质粒DNA为模板,扩增大肠杆菌基因,并通过凝胶电泳检测。首先观察电泳槽的水平情况,通过调节脚垫旋钮将电泳槽置于水平面上。此后在30mL 1×TAE电泳缓冲液中称取0.24g琼脂糖,将琼脂糖颗粒在微波炉中完全溶解,冷却至50℃时加入10×上样缓冲液,混合并倒入橡胶板中并放置梳子,凝固后除去。然后将PCR反应产物与溴酚蓝混合并依次加到固化的凝胶孔中。在PCR反应结束后,设定120V、100mA于1×TAE电泳缓冲液中电泳,胶体右侧滴加marker。最后将电泳检测扩增条带置于凝胶成像系统中成像并记录。
图表编号 | XD00144279200 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.08.15 |
作者 | 许佳莅 |
绘制单位 | 海宁市畜牧兽医站 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |