《表2 耐药基因的PCR反应程序》

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《洛阳地区规模化猪场大肠杆菌耐药基因检测及耐药性分析》

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注:变性、退火、延伸共36个循环。

以质粒DNA为模板，对17株试验菌株进行PCR检测。反应体系:2×Taq PCR Master Mix（含2×Taq DNA聚合酶、2×d NTP、2×PCR Buffer和Mg Cl2）10μL，双蒸水7.6μL，上、下游引物各0.7μL，质粒DNA模板1μL。反应程序见表2。取PCR产物用1.5%或2.0%琼脂糖凝胶电泳检测（TEM、SHV产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，其他产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳），并用凝胶成像仪观察结果、拍照。从检出的耐药基因中分别取一份阳性PCR产物送往生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，测序结果与Gen Bank中的相应基因序列进行比对。