《表2 三轮PCR反应程序》

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《两种转基因抗虫棉L280和L282外源基因插入位点的分析》

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注：ramp 0.2℃·s-1表示变温速度，变温过程每秒为0.2℃。

FPNI-PCR扩增体系和扩增程序参考文献[7]，具体体系与程序见表2。第一轮PCR以基因组DNA为模板，分别将左边界引物LSP1与9个融合引物FP、右边界引物RSP1与9个融合引物FP配对，共18对引物，按照第一轮PCR程序进行扩增；第二轮PCR分别以第一轮PCR的18个产物（1μL）作为模板，左边界引物对使用LSP2/FSP1，右边界引物对使用RSP2/FSP1，按照第二轮PCR程序进行扩增；将第二轮PCR的产物分别稀释50倍，各取1μL作为模板，左边界引物对使用LSP3/FSP2，右边界引物对使用RSP3/FSP2，按照第三轮PCR程序进行扩增，共计18个产物，三轮PCR结束后将有条带的送去测序，将测序结果分别与载体和棉花基因组进行比对分析。