《表2 本研究用到的引物序列》

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《甘薯IbSSI基因启动子序列的克隆及瞬时表达分析》

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注:下划线序列为限制性酶切位点及其保护碱基

首先利用CTAB方法提取‘徐781’试管苗叶片的基因组DNA，并根据之前克隆到的IbSSI基因组5'端序列设计两条反向引物GSP1/2用于DNA步移法克隆启动子（表2）。之后利用Clonetech公司的GenomeWalker Universal Kit试剂盒进行IbSSI基因上游启动子序列的扩增，主要步骤包括GenomeWalker DNA文库的构建（基因组DNA纯度检测，基因组DNA的酶切消化，DNA纯化，GenomeWalker接头连接）和GenomeWalker DNA步移扩增启动子（5'端反向引物设计，DNA步移巢式PCR扩增）。对巢式PCR扩增到的启动子片段进行回收纯化，连接至pMD19-T克隆载体后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，将菌液PCR检测阳性的单克隆送华大基因公司进行测序。