《表2 本研究所用到的引物》

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《基于CRISPR/Cas9技术创建OssHSP家族基因突变体》

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我们提取了转基因阳性植株叶片DNA，利用PCR技术对转基因植株中潮霉素基因进行了扩增（图5），得到50株阳性植株。80%以上的转基因植株中扩增出了潮霉素基因。为了进一步检测基因编辑是否成功，我们对这些转基阳性苗进行测序。利用测序引物进行PCR扩增并测序（表1），部分结果显示（图6表2），在设计的靶点序列区域有48株OssHSP1转基因植株碱基敲除成功，分别为1段碱基缺失的杂合突变、1个碱基G插入的杂合突变类型、1个碱基T插入的杂合突变类型、1个碱基C插入的杂合突变类型以及1个碱基A插入的纯合突变类型；在设计的靶点序列区域有6株OssHSP2转基因植株碱基敲除成功，均为1段碱基缺失的杂合突变。