《表1 本研究所用到的引物信息》

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《鲫Carassius auratus基因组中多拷贝瘦素基因的克隆与序列分析》

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克隆Lep基因的PCR引物来源于Tang等[5]的报道及根据Gen Bank数据库序列信息设计的新引物。引物的信息如表1所示，克隆不同Lep基因所需的具体引物对在结果部分分别叙述。PCR反应体系为50μL，包含25μL的2×Es Taq MasterMix（Dye）（康维世纪）、10μM的上下游引物各2μL，1μL的DNA模板，用ddH2O补足至50μL。PCR扩增条件如下:94℃预变性2 min；35个循环，每个循环94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸90s；72℃终延伸15min。所有PCR扩增产物经1%的琼脂糖凝胶电泳后，用Axygen胶回收试剂盒纯化。纯化产物连接至pMD19-T载体（Ta Ka Ra），并转化至DH5α感受态细胞（Ta Ka Ra）中。挑选阳性克隆，委托金唯智生物科技有限公司用3730XL毛细管电泳平台测序。