《表1 本实验中用的引物序列》

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《赤眼鳟β-肌动蛋白基因克隆、组织表达与稳定性分析》


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根据NCBI中公布的草鱼(Ctenopharyngodon idella,GenBank:AAA49197.1)和鲫鱼(Carassius auratus,GenBank:AB039726.2)的β-actin核苷酸序列设计保守区域PCR扩增引物(表1),并送往上海生工生物工程公司合成。扩增β-肌动蛋白基因c DNA核心片段,反应体系(总体积50μL):赤眼鳟肝脏c DNA 2μL、0.5μL TaKaRa ExTaq酶(TaKaRa,大连)、5μL 10×Ex Taq缓冲液、2μL dNTP(10 mmol/L each)、正反引物(10μmol)各1μL和38.5μL灭菌超纯水。扩增产物直接送上海生工测序。根据克隆得到的赤眼鳟β-actin的c DNA核心片段,设计5’和3’的特异性引物(表1,上海生工合成),按照Ta Ka Ra RACE试剂盒说明书进行扩增,获得基因c DNA 5’端序列和3’端序列。