《表1 实验中用到的基因的引物序列》

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《猪miR-331-3p过表达载体的构建及其对细胞增殖的影响》

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将PK15细胞接种到6孔板，待细胞汇合度达到80%时转染细胞，48 h后提取细胞总RNA，然后反转录为cDNA。利用Primier 5.0设计CDK2、CDK3、CDK4、Cyclin B、ING5、CDKN1A和GAPDH（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）基因的荧光定量引物（表1），其中GAPDH持家基因作为内参[11]。利用LightCycler?96实时荧光定量PCR系统，检测过表达miR-331-3p后细胞周期相关基因的表达情况，其定量结果通过2-ΔΔCt的方法计算。反应体系（20μL）为:2×TB Green Premix Ex Taq 10μL，上下游引物各0.4μL，cDNA模板2μL，ddH2O 7.2μL。