《表1 本研究中用到的引物》

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《高盐胁迫下大弹涂鱼MHC Iα基因对病毒拟似物poly(I:C)的免疫反应》

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采用RNAiso Plus试剂，根据制造商要求，提取大弹涂鱼各组织总RNA，并采用TransGen试剂盒进行反转，得到可以用于实时荧光定量的cDNA模板。根据实验室已获得的大弹涂鱼cDNA文库，筛选出MHC Iα基因并验证。在NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ncbisearch）公共数据库中检索获得近缘物种的相关序列，在MHC 1α基因编码序列两端的保守区，利用软件Primer Premier 6.0设计特异性引物，所有引物均由生工生物工程股份有限公司（上海，中国）合成并验证（表1）。PCR反应体系为（10μL）:0.4μL正向引物、0.4μL反向引物、1μL cDNA模板（0.1μg/μL）、5μL的Taq酶和3.2μL无菌水，反应程序如下:95℃5 min；95℃15 s，60℃15 s，72℃1 min，循环30次；72℃5 min。