《表1 本研究中用到的寡核苷酸引物》

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《温带亚高山针叶林土壤碳循环微生物群落的时空动态》

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用表1所示的寡核苷酸引物，从提取的土壤微生物DNA中扩增cbb M、amylase、cellulase基因.PCR扩增程序见文献[13-15].将扩增到的3个基因分别连接到克隆载体p MD-18T上，经酶切和PCR鉴定，并进行测序分析.得到的重组质粒p MD-cbb M、p MD-cellulase和p MD-amylase作为实时定量PCR（q PCR）分析的标准品.建立cbb M、amylase和cellulase基因拷贝数PCR扩增标准曲线.首先使用Tecan 200Pro酶标仪测定质粒DNA浓度，根据目的片段长度和质粒浓度计算cbb M、amylase和cellulase质粒的拷贝数，分别为2.849×l08，2.858×l08，2.998×l08copies/ng.将构建好的质粒按10倍浓度进行梯度稀释后，作为质粒标准品与其它样品模板一起扩增，从而得到样品中功能基因的拷贝数.cbb M基因标准曲线的相关系数R2=1.000，斜率为-3.404，扩增效率E=96.7%；amylase基因标准曲线的相关系数R2=0.999，斜率为-3.868，扩增效率E=81.4%；cellulase基因标准曲线的相关系数R2=0.999，斜率为-3.355，扩增效率E=98.6%.