《表2 实验中用到的引物序列及用途》

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《中间锦鸡儿CiDUF4228-3基因的克隆与表达分析》

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利用Primer 5软件设计特异性引物FCiDUF-4228-3和RCiDUF4228-3扩增基因完整的编码框，引物所加酶切位点为SalⅠ和SacⅠ（表2）。利用Primer STAR（TaKaRa公司）高保真酶扩增该基，以提取的g DNA和cDNA为模板。c DNA扩增条件为:98℃预变性1 min，98℃变性10 s，57℃退火10 s，72℃延伸1 min，30个循环，72℃补充延伸10 min。g DNA扩增延伸时间为2 min，其余扩增条件均相同。将扩增得到的目的片段连接到克隆载体pEASY-Blunt simple cloning vector（全式金，codeCB111-02），并转化到Trans1-T1（全式金，codeM47023）大肠杆菌感受态细胞中，菌落PCR和酶切挑选鉴定阳性克隆，送测序。将测序正确的克隆通过SalⅠ和SacⅠ酶切获得目的基因片段，连接到用相同内切酶线性化的植物表达载体pCanG-HA上，转化到Trans1-T1大肠杆菌感受态细胞中。鉴定无误后，将连有目的基因的重组质粒pCanG-HA-CiDUF4228-3电转化到农杆菌GV3101感受态细胞中。