《表1 试验中用到的引物及其序列》

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《茶树钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK17的鉴定及表达分析》

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使用龙井43的cDNA为模板，以在转录组中通过同源比对得到的候选序列为参考，设计引物使用RT-PCR进行基因全长克隆验证。基因克隆选用KOD-Plus-Neo（Toyobo，日本）高保真Taq酶，PCR反应体系为50μL，包括以下组分:以10倍稀释的上述cDNA 1.0μL为模板、10×KOD buffer 5.0μL、上下游引物各1.5μL、dNTP 5.0μL、KOD-Plus-Neo 1.0μL、MgSO4 4.0μL，其余用ddH2O补足。PCR反应程序为:首先经94℃预变性3 min；然后98℃变性10 s，56℃退火30 s，68℃延伸90 s，38个循环；68℃延伸7 min，于4℃保存。反应结束后的RCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，对目标条带切胶回收，连接到Blunt-zero（TransGen，中国）克隆载体，转化DH5α大肠杆菌，涂板后37℃培养12～14 h，挑取单克隆进行测序验证。基于已经发表的舒茶早基因组序列信息[18]，通过比对获得目标基因转录起始位点（ATG）前约2 000 bp的启动子区序列，设计引物，以龙井43的DNA为模板进行RT-PCR扩增，PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，切胶回收、连接入克隆载体、涂板挑取单克隆测定启动子区序列。引物合成和测序由上海华津生物有限公司完成，本研究中涉及的引物及序列见表1。