《表2 芝麻过敏原蛋白11S球蛋白Ses i 6的MS定量特征肽及其离子对[82]》

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《芝麻过敏原分子特征与检测方法研究进展》

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Huschek等[82]以100 mmol/L碳酸氢铵+4 mol/L尿素+5 mmol/L二硫苏糖醇（pH 8.2）溶液提取蛋白，采用溶液内酶切的方式得到酶切肽段，利用Nexera UHPLC/HPLC及SCIEX QTRAP 5500 MS/MS液相色谱-MS联用（liquid chromatograph-MS，LC-MS）系统定性定量食品中的芝麻含量。以11S球蛋白Ses i 6的3条肽段为芝麻过敏原的特征肽段（表2），并将同位素标记的特征肽段作为内标，在面包、小麦原料粉、饼干中进行芝麻过敏原的定量，回收率为70%～113%，定量限为10～50 mg/kg（过敏食物/食品基质）。MS检测依赖蛋白数据库，数据库不全等问题容易导致特征肽段的非特异性。经本团队的初步研究表明，表2中的芝麻过敏原Ses i 6特异肽段SPLAGYTSVIR实际在碧根果蛋白酶切肽段中也存在。因此，在靶肽段的特异性验证时需要扩大阴性样品范围，降低非特异性。该方法用稳定同位素标记的特征肽作为内标，在前处理结束后加入样品中用以校正MS离子化的不稳定性，而且能校正基质对酶切过程造成的干扰，使建立的方法更加准确可靠。由此可见，LC-MS检测技术是检测过敏原蛋白的有效新方法。