《表2 大豆中11种主要过敏原的特征肽段信息及其MRM参数》

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《超高效液相色谱-串联质谱法检测大豆主要过敏原蛋白》

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注：*.该肽段尚未有文献报道，为本研究首次发现。

在Uniprot数据库中搜索并下载大豆蛋白的氨基酸序列，使用Protein Pilot软件结合Paragon算法针对大豆蛋白质数据库对经UPLC-Q-TOF-MS分析得到的MS2谱进行搜库处理，以生成蛋白质、肽序列、丰度和修饰信息的列表，实现蛋白质和多肽的鉴定。在95%置信度下，针对性地鉴定出11种大豆主要过敏原，即大豆球蛋白的G1、G2、G3、G4和G5亚基，β-伴大豆球蛋白的α′、α和β亚基，P34、P28及KTI。为确定质谱检测的标志物，对经Uniprot数据库结果比对后得到的一系列肽段进行筛选。筛选原则如下：长度在7～21个氨基酸之间；m/z<1 250；不含任何修饰氨基酸（半胱氨酸（C）与蛋氨酸（M））；不含内部胰蛋白酶切割位点；在酶切位点处没有连续的精氨酸（R）或赖氨酸（K）残基[24-28]。根据上述原则，每个目标过敏原筛选得到1～4条预选特征肽段，共计29条（表2），其中11条为本研究首次发现。将所选择的预选特征肽段利用BLAST分析工具进行Uni Prot KB数据库比对，以检查物种间同源性，确保这些肽段对于其所属的大豆过敏原具有特异性。比对结果表明，所选特征肽段仅存在于其所属大豆过敏原中，均可作为大豆过敏原定性定量蛋白质组学研究的候选靶肽。