《表2 引物序列：利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系》

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《利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系》

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CRIS-PITCh（v2）donor载体的构建流程参考图1（b）。根据敲入EGFP的位置，设计并合成两对引物（表2），对目的片段和载体分别进行PCR扩增，扩增后片段进行琼脂糖凝胶电泳分离并纯化。将纯化后片段和载体用重组酶进行同源重组后，利用DH5α感受态细胞进行转化，挑取单克隆并进行菌液鉴定以及测序比对分析，选取序列正确的单克隆进行质粒中提备用。