《表3 siRNA序列：利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系》

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《利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系》

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在24孔板中放入圆形玻片后加入约2.5×104个RPE-1细胞，在培养箱中培养过夜。根据i Max说明书进行转染，将siRNA（表3）与i Max按照比例混合后静置15 min，然后逐滴加入细胞中。转染6 h后吸弃培养液，加入新鲜培养液继续培养。48 h后吸弃培养液并用PBS洗两次，随后沿壁加入冰甲醇并在-20℃固定细胞10 min。固定后使用Centrin2抗体染色以指示中心体，并在染核后封片。使用激光扫描共聚焦显微镜（confocal laser scanning microscope）观察并拍摄染色结果。