《表1 CEP290-gRNA序列》

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《利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系》

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CRISPR-Cas9载体的实验流程参考图1（a）。首先，设计CEP290-gRNA引物（表1）并送北京博迈德公司合成。gRNA引物退火形成DNA双链后，将退火产物与BpiⅠ酶切后纯化的pX330A-1x2载体片段按比例混合于连接缓冲体系中，然后利用T4DNA连接酶连接；连接产物利用DH5α感受态细胞进行转化涂板。挑选单克隆进行菌液鉴定及测序分析；选取序列正确的单克隆转入培养基中扩大培养，提取p X330-1x2-gRNA重组质粒。