《表1 引物序列：基于CRISPR-Cas9系统构建GSTZ1基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响》

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《基于CRISPR-Cas9系统构建GSTZ1基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响》

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Lenti CRISPR V2-sg RNA质粒构建成功，GSTZ1-sgRNA与慢病毒包装质粒p MD2.G、ps PAX2用Lipo3000共转染HEK293T细胞，2 d后收取慢病毒上清并感染Hep G2细胞系，用1μg/m L嘌呤霉素筛选单克隆细胞系，提取细胞基因组DNA，TA克隆并送检测序，测序引物见表1。鉴定到2株单克隆细胞系，命名为KO1、KO2，测序序列比对如图1所示，KO1相比野生型序列缺失了7个碱基（GTGGCTT)，KO2相比野生型序列缺失了5个碱基（CACTT），分别造成各自编码蛋白质的移码突变（图1）。用Western blot检测KO1、KO2细胞GSTZ1蛋白的表达，发现GSTZ1蛋白表达缺失（图2）。