《表1 靶序列及引物序列：稳定敲降NF-YB基因HeLa细胞系的构建》

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《稳定敲降NF-YB基因HeLa细胞系的构建》

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利用Sigma公司网站（http://www.sigmaaldrich.com/）查询目的基因的sh RNA引物序列，选择基因敲低效率较高的序列插入酶切位点，在序列前后加入几个保护碱基提高酶切活性，Loop结构选用TTCAAGAGA以避免形成终止信号。sh RNA引物送苏州吉玛基因有限公司合成。将寡聚核苷酸链退火合成相应的双链DNA，经与Bam HⅠ与Eco RⅠ双酶切线性化的慢病毒载体连接，转化感受态，经氨苄抗性筛选，提取H1/GFP-Puro-sh RNA-NF-YB质粒（按照质粒提取试剂盒步骤操作）送苏州吉玛基因有限公司测序。阳性重组质粒分别命名H1/GFP-Puro-sh RNA-NF-YB-sh1、H1/GFP-Puro-sh RNA-NF-YB-sh2、H1/GFP-Puro-sh RNA-NF-YB-sh3，空白对照质粒命名为H1/GFP-Puro-sh RNA-NF-YB-control（下文中分别简称SH1、SH2、SH3、CON）。靶序列及引物序列见表1。