《表1 基因引物序列：羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立》

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《羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立》

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将上述分选的羊水干细胞（检测干性标记物的表达用第5代和第30代羊水干细胞，检测Tuj1的表达用第3，5，8，12，15，19，21，27，30代羊水干细胞）消化、离心去上清，并进行细胞计数，用传统RNA提取方法一般需要1×106个细胞；在离心去上清后的细胞中加入1 mL Trizol，吹打混匀至液体澄清且无细胞团块，移入1.5 mL离心管中；每加入1 mL Trizol，就按比例加入200μL氯仿，颠倒振荡混匀15 s，室温静置5 min；4℃12 000×g离心15 min，吸取上层的水相（400-500μL），转入另一个1.5 mL EP管；加入0.5 mL异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10 min；4℃12 000×g离心10 min，弃上清，加入1 mL体积分数为75%乙醇，轻轻洗涤沉淀；4℃7 500×g离心5 min，弃上清，晾干，加入适量的DEPC H2O溶解；吸取1.0-2.0μg RNA，使用Invitrogen的反转录试剂盒获取PCR的模板c DNA；将获取的模板c DNA通过PCR试剂盒进行扩增，PCR引物的设计合成及参数的设定参见文献[17-18]；电泳及图像扫描：取PCR产物6μL，用2%琼脂糖凝胶电泳，经溴化乙锭染色，在Image Master VDS-CL上扫描，目标基因的相对表达含量为目的基因及内参基因的电泳条带灰度积分比值。各基因引物序列见表1。